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          DNA提取技術服務到底是怎么樣的呢?

          發布時間: 2022-11-29  點擊次數: 157次
           
            DNA提取技術服務是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細胞壁,然后采用一種新型的酵母質粒純化柱實現從酵母細胞中進行小量質??焖俪樘岬脑噭┖?。
            DNA提取技術服務本實驗方法的基本原理是,在高鹽狀態下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態下,DNA被洗脫下來。此法簡便快捷,可在30分鐘內同時提純二十多個樣品。從3~5ml培養過夜的含高拷貝質粒的菌液中可以獲得10~20μg高純度的質粒DNA,用于酶切、轉化、DNA自動測序和手工測序等。
            DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?;瘜W方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有硅質材料、陰離子交換樹脂等。
            DNA提取方法:
            1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb
            2、甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
            3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
            4、異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)
            5、表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
            6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應。
            7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。
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